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PCR基因擴增實驗室

作者:admin 出處:科(ke)瓦特發(fa)表(biao)時間:2021-01-11 08:43:42
 

PCR基因擴增實驗室介紹和標準:

PCR實驗室(shi)又叫基因擴增實驗室(shi)。PCR是(shi)聚合酶(mei)鏈式(shi)反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是(shi)一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fu)制。通過DNA基因追蹤(zong)系(xi)統(tong),能迅速(su)掌握(wo)患者體內的病毒含量(liang),其精確度高達(da)納米級別。

PCR實(shi)驗(yan)(yan)室必(bi)須建(jian)立嚴格的實(shi)驗(yan)(yan)室管理(li)制(zhi)度、建(jian)立標準(zhun)化操(cao)作程序(SOP)、建(jian)立系列質量管理(li)文(wen)件等,確保實(shi)驗(yan)(yan)室日常運行符合國家衛生部的要求,確保檢測結(jie)果準(zhun)確、確保實(shi)驗(yan)(yan)室衛生安全,確保實(shi)驗(yan)(yan)室長期穩(wen)定運行.

PCR設計規范/PRINCIPLES

配(pei)置原則 室全PCR線實(shi)驗(高檔(dang)實(shi)驗室) 標準PCR實驗(yan)室(shi)(中檔實驗(yan)室(shi)) 普(pu)通實(shi)驗室(普(pu)通實(shi)驗室) 測序實驗(yan)室(專科實驗(yan)室)
開展項目            涵蓋了(le)目前分子生物(wu)學能開展所(suo)有項目,達到國內(nei)甚至 一流CR實驗室(shi)水平。 檢測項(xiang)目齊全,涵蓋了目前臨床需求的常規檢測項(xiang)目,達(da)到國內(nei)PCR標準(zhun)實驗室的檢測水平。 臨床(chuang)(chuang)科室(shi)或小型醫院開展PCR項(xiang)目,檢測(ce)項(xiang)目滿足臨床(chuang)(chuang)需求,達到(dao)或達不到(dao)國內PCR標(biao)準實驗室(shi)的標(biao)準。 開展(zhan)測(ce)序的所有(you)檢(jian)測(ce)項目(mu),達到標準(zhun)PCR實驗室水平
項目 性            除(chu)開展常(chang)規的檢測(ce)項目(mu)(mu)外,還(huan)需開展高端項目(mu)(mu),如測(ce)序項目(mu)(mu)、超敏(min)PCR項目(mu)(mu)、腫瘤檢測(ce)等高端項目(mu)(mu)。 開展項目技術性能基本滿足臨床需求,達到國(guo)內PCR標準實(shi)驗(yan)室的(de)檢測水平。 開(kai)展項目技術(shu)性只能滿足科室(shi)或小(xiao)型醫院的當前(qian)需求,不具有 性。 PCR測(ce)序檢測(ce)項目,達(da)到個體化診療的(de)需求。
人員要求            至少有兩人,除經過(guo)普通PCR上崗培訓外(wai),要具有測序(xu)項目檢測實(shi)驗及(ji)結果分(fen)析能力。 至少有(you)兩(liang)人,除(chu)經過普(pu)通PCR上崗(gang)培訓外(wai),要具有(you)測序項目檢測實驗(yan)及(ji)結果分析能力。 至少有兩人,除(chu)經過普通PCR上崗培(pei)訓外,要具(ju)有測序項目檢測實驗及結果分析能(neng)力。 至少有兩人,除(chu)經過普通PCR上崗培(pei)訓外,要具有測(ce)(ce)序項目(mu)檢測(ce)(ce)實驗及結果分析能力。
 

PCR基因擴增實驗室技術參數:


區域 壓力 溫度 相對濕度 照明
PCR走廊 +5-0Pa 20-26度 40-60%RH 主實驗室≥300LX,其余房間20-300LX
PCR試劑準備區 +10Pa
PCR樣品制備區 +15Pa
PCR擴增及擴增產物分析區 -15-250Pa

基因擴增檢驗實驗室平面布局

1)臨床基(ji)因擴增檢驗(yan)實驗(yan)室區域(yu)設置原則(ze)

1、 試劑儲(chu)存和準備(bei)區                                                          2、 標本制(zhi)備區
PCR實驗室試劑準備區PCR產物擴增區
3、 擴(kuo)增(zeng)反應混合(he)物配(pei)制和擴(kuo)增(zeng)區                                4、 擴增產物分析(xi)區(qu)
PCR擴增區PCR產物分析區

如使用(yong)全自動(dong)分析儀(yi),區域可適當合并。

2)各工作(zuo)區域必須有明確的標(biao)記,避免(mian)不同工作(zuo)區域內(nei)的設備、物品混用。

3)進入(ru)各(ge)工作區(qu)域必(bi)須嚴格按照單(dan)一方向進行,即試(shi)劑儲存(cun)和準備區(qu)—>標本制(zhi)備區(qu)—>擴增(zeng)反應混合(he)物(wu)配制(zhi)和擴增(zeng)區(qu)—>擴增(zeng)產物(wu)分(fen)析區(qu)。

4)不同(tong)的工(gong)作(zuo)區域使(shi)用不同(tong)的工(gong)作(zuo)服(fu)(例(li)如不同(tong)的顏色)。工(gong)作(zuo)人(ren)員離(li)開各(ge)工(gong)作(zuo)區域時(shi),不得將工(gong)作(zuo)服(fu)帶出。

 PCR基因擴增實驗室平面圖

PCR基因擴增實驗室平面圖

PCR擴增(zeng)(zeng)檢驗(yan)實驗(yan)室原則上分(fen)為三(san)個單(dan)獨(du)的(de)工作區(qu)(qu)域(yu):試劑(ji)貯存(cun)和(he)準備(bei)區(qu)(qu)、標本(ben)制備(bei)區(qu)(qu)、擴增(zeng)(zeng)和(he)擴增(zeng)(zeng)產物分(fen)析(xi)(xi)區(qu)(qu)。為避免(mian)交(jiao)叉污(wu)染(ran),進(jin)入各(ge)個工作區(qu)(qu)域(yu)必須嚴格遵循(xun)單(dan)一方向進(jin)行,即只能(neng)從試劑(ji)貯存(cun)和(he)準備(bei)區(qu)(qu)→標本(ben)制備(bei)區(qu)(qu)→擴增(zeng)(zeng)和(he)擴增(zeng)(zeng)產物分(fen)析(xi)(xi)區(qu)(qu)。各(ge)實驗(yan)區(qu)(qu)之間的(de)試劑(ji)及樣品傳(chuan)(chuan)遞應通過傳(chuan)(chuan)遞窗進(jin)行。

(1)試劑貯存和(he)準備區(qu)

該實驗區(qu)(qu)主(zhu)(zhu)要進行的(de)操作(zuo)為貯存(cun)試(shi)劑的(de)制備、試(shi)劑的(de)分裝和(he)主(zhu)(zhu)反應(ying)(ying)混合液的(de)制備。試(shi)劑和(he)用于樣(yang)品制作(zuo)的(de)材料應(ying)(ying)直(zhi)接運(yun)送至(zhi)該區(qu)(qu),不得經過其他區(qu)(qu)域。試(shi)劑原材料必須貯存(cun)在本區(qu)(qu)內(nei),并在本區(qu)(qu)內(nei)制備成(cheng)所需的(de)貯存(cun)試(shi)劑。對(dui)與氣流壓(ya)力(li)的(de)控制,本區(qu)(qu)應(ying)(ying)對(dui)外界保(bao)持微(wei)正(zheng)壓(ya)。

(2)標(biao)本制備區

該區(qu)域主要進行(xing)的(de)(de)(de)操作為樣本的(de)(de)(de)保存、核(he)酸(RNA、DNA)提取、貯(zhu)存及(ji)其(qi)加(jia)入至擴(kuo)增反應(ying)管和測定DNA的(de)(de)(de)合成(cheng)。本區(qu)的(de)(de)(de)壓力梯度要求為:相(xiang)對(dui)于(yu)鄰近區(qu)域為正壓,以避免(mian)從鄰近區(qu)進入本區(qu)的(de)(de)(de)氣溶膠(jiao)污染(ran)。另外,由于(yu)在加(jia)樣操作中可能(neng)會發(fa)生氣溶膠(jiao)所(suo)致(zhi)的(de)(de)(de)污染(ran),所(suo)以應(ying)避免(mian)在本區(qu)內不必要的(de)(de)(de)走動。

(3-4)擴增(zeng)和擴增(zeng)產物分析區

該區(qu)域主要進(jin)行(xing)(xing)的(de)(de)(de)操作為DNA擴增和擴增片段的(de)(de)(de)測定。此外(wai),已制(zhi)(zhi)備的(de)(de)(de)DNA模板(ban)(來自樣本(ben)制(zhi)(zhi)備區(qu))的(de)(de)(de)加(jia)入和主反應混(hun)合液(ye)(ye)(來自試劑貯存和制(zhi)(zhi)備區(qu))制(zhi)(zhi)備成(cheng)反應混(hun)合液(ye)(ye)等也(ye)可(ke)在(zai)(zai)(zai)本(ben)區(qu)內進(jin)行(xing)(xing)。本(ben)區(qu)的(de)(de)(de)壓(ya)力梯度(du)要求為:相對于鄰近區(qu)域為負壓(ya),以避免氣溶膠從本(ben)區(qu)漏出。為避免氣溶膠所(suo)致的(de)(de)(de)污(wu)染(ran),應盡量減少在(zai)(zai)(zai)本(ben)區(qu)內的(de)(de)(de)不(bu)必(bi)要的(de)(de)(de)走(zou)動。個(ge)別操作如加(jia)樣等應在(zai)(zai)(zai)超凈臺(tai)內進(jin)行(xing)(xing)。

PCR區完成以后,需要分析樣(yang)品(pin)并(bing)解(jie)釋數據(ju),應該留出(chu)一(yi)(yi)個專門用于(yu)反應后處(chu)理(li)樣(yang)品(pin)的地方。后PCR活(huo)動(dong)中使(shi)用的所用試(shi)劑、一(yi)(yi)次性耗材和(he)儀器都必(bi)須是專門用于(yu)這一(yi)(yi)目的,決不能把實驗室這一(yi)(yi)區域(yu)的試(shi)劑或儀器用于(yu)任(ren)何(he)前PCR活(huo)動(dong)。產物分析區如使(shi)用全自動(dong)分析儀,區域(yu)可適(shi)當合并(bing)。

(5)緩(huan)沖(chong)區(qu)(qu)與沖(chong)洗(xi)區(qu)(qu)

整(zheng)(zheng)(zheng)個(ge)區(qu)域有一個(ge)整(zheng)(zheng)(zheng)體緩(huan)沖走(zou)廊。每個(ge)獨(du)立實驗(yan)區(qu)設置有緩(huan)沖區(qu),同時各(ge)區(qu)通(tong)過氣壓調節(jie),使整(zheng)(zheng)(zheng)個(ge)PCR實驗(yan)過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染(ran)并降低擴增(zeng)產物對人員和環境的污染(ran)。

可打開緩沖區(qu)(qu)Ⅰ,緩沖區(qu)(qu)Ⅱ和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)(qu)的(de)排風(feng)扇(shan)往外(wai)排氣,在實驗(yan)區(qu)(qu)的(de)外(wai)墻上(shang)和(he)各扇(shan)門上(shang)都安裝有風(feng)量可調的(de)回風(feng)口,空氣通過回風(feng)口向室內(nei)換氣。外(wai)面有用于(yu)實驗(yan)后消(xiao)毒(du),消(xiao)毒(du)區(qu)(qu)域有專用清洗液和(he)專用潔凈洗手池,以及消(xiao)毒(du)紙巾。

若房間(jian)進深允許(xu),可設(she)PCR內部專用走(zou)廊。需要指(zhi)出的是在(zai)減少(shao)室內外(wai)空氣交換方(fang)面,緩沖間(jian)比專用走(zou)廊更有意(yi)義(yi)。

各個區域(yu)之(zhi)間(jian)應具備單(dan)向的實驗(yan)工藝流(liu)、物(wu)流(liu)、人(ren)流(liu)與氣流(liu),形成單(dan)向流(liu)程的保護屏障,避免實驗(yan)之(zhi)間(jian)的相互干(gan)擾,防止核酸(suan)氣溶膠對實驗(yan)過程造成污染(ran)產生假性(xing)結(jie)果(guo)。

PCR實驗室案例欣賞


以下為科瓦特設(she)計(ji)的疾控(kong)中心(xin)PCR基因擴增實驗室的整(zheng)體建設(she):

1、主體結構:

主體(ti)為彩(cai)鋼板、鋁合(he)金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合(he)金50內圓角鋁,從而(er)解決容(rong)易污染(ran)、積(ji)塵、不易清(qing)掃等問題(ti)。結構牢固,線條(tiao)簡明,美觀(guan)大(da)方,密封性好。

2、標準(zhun)的三區分隔和氣壓調(diao)節(jie):

將PCR過(guo)程分成試(shi)劑準備、標本制備和(he)PCR擴(kuo)增、分析三個(ge)(或)四個(ge)獨立的(de)實(shi)驗(yan)區(qu)(qu)。整(zheng)個(ge)區(qu)(qu)域有(you)一(yi)個(ge)整(zheng)體(ti)緩(huan)沖(chong)走廊。每個(ge)獨立實(shi)驗(yan)區(qu)(qu)設(she)置(zhi)有(you)緩(huan)沖(chong)區(qu)(qu),同時各區(qu)(qu)通(tong)過(guo)氣壓(ya)調節,使整(zheng)個(ge)PCR實(shi)驗(yan)過(guo)程中試(shi)劑和(he)標本免受氣溶膠的(de)污染(ran)并降低擴(kuo)增產物(wu)對人員和(he)環境(jing)的(de)污染(ran)。

可打開緩沖(chong)區(qu)Ⅰ,緩沖(chong)區(qu)Ⅱ和(he)PCR擴增區(qu)的(de)排風扇(shan)往外排氣(qi),在(zai)實(shi)驗(yan)區(qu)的(de)外墻上(shang)和(he)各(ge)扇(shan)門(men)上(shang)都安裝有風量(liang)可調的(de)回風口,空氣(qi)通過回風口向室內換氣(qi)。

3、消毒:

在三個實驗(yan)區和三個緩沖區頂(ding)部(bu)以及傳送窗內(nei)部(bu)安裝有(you)紫(zi)外燈,供消(xiao)毒用。在試劑準備區和標本制備區還(huan)設置(zhi)移動紫(zi)外線燈,對實驗(yan)桌(zhuo)進(jin)行局部(bu)消(xiao)毒。

4、機(ji)械連(lian)鎖不銹(xiu)鋼傳遞窗:

試劑和標本通(tong)過(guo)機械連鎖不銹鋼(不建議使用電(dian)子連鎖方式(shi))傳遞(di)窗傳遞(di),保證試劑和標本在傳遞(di)過(guo)程中不受污染(人(ren)物分流)。

5、地面

地(di)面建議使用(yong)PVC卷材地(di)面或自流坪(ping)地(di)面,整(zheng)體性好。便(bian)于(yu)(yu)進行清掃,耐腐蝕。沒(mei)有條件的也可(ke)采用(yong)水磨石地(di)面,或大塊的瓷磚(至少800mm×800mm)接(jie)縫需要小于(yu)(yu)2mm。

6、照明

 

燈具(ju)要選用凈化燈具(ju),能達到便(bian)于(yu)清洗(xi)、不積(ji)塵的特點。

科瓦特PCR實驗室案例展示:

PCR實驗室細節圖PCR產物分析區
                      生物安全標識                                                   產物擴增區
PCR實驗室產物分析區PCR緩沖區
                        PCR標本制備區                                         PCR緩沖區
PCR洗手消毒區PCR換衣處

                            PCR洗手消毒區(qu)                                          PCR沐浴換衣(yi)區(qu)
PCR通風與消防區PCR控制系統
   PCR通(tong)風(feng)與消防區 (不(bu)同區域工作人員衣服不(bu)同)      ;            ;  PCR負壓(ya)控制區

在建設的過程中應注意:

●規范的安裝(zhuang)流程(cheng)和全面的服務(wu)流程(cheng)。

●嚴格(ge)按(an)照規范科學(xue)設計的(de)安裝流程。

●安裝前需(xu)要(yao)確定(ding)以下(xia)安裝條件,如:電(dian)(dian)(dian)源電(dian)(dian)(dian)壓,電(dian)(dian)(dian)源進(jin)(jin)線位(wei)置(zhi),電(dian)(dian)(dian)話網絡線進(jin)(jin)線位(wei)置(zhi),進(jin)(jin)水水壓,最(zui)小安裝空(kong)間,地面(mian)平整度,通風(feng)孔、進(jin)(jin)水管(guan)和下(xia)水管(guan)的(de)位(wei)置(zhi)等,理想狀態的(de)空(kong)間尺(chi)寸和通風(feng)口尺(chi)寸。

PCR即聚合(he)酶鏈式反應(ying),是分子(zi)生物(wu)學研究和(he)實(shi)(shi)驗(yan)的(de)(de)常規方法(fa),也是生物(wu)學、醫學臨床等領域(yu)廣泛應(ying)用的(de)(de)實(shi)(shi)驗(yan)技術。其特點(dian)是能將(jiang)(jiang)微量的(de)(de)DNA大幅增(zeng)加。實(shi)(shi)驗(yan)室(shi)分為四(si)個(ge)區域(yu),進入各工作(zuo)區域(yu)必須嚴格按照(zhao)單一(yi)方向進行,不(bu)同(tong)(tong)的(de)(de)工作(zuo)區域(yu)使用不(bu)同(tong)(tong)的(de)(de)工作(zuo)服(fu)(例如不(bu)同(tong)(tong)的(de)(de)顏色)。工作(zuo)人(ren)員離開各工作(zuo)區域(yu)時,不(bu)得將(jiang)(jiang)工作(zuo)服(fu)帶出,

PCR整(zheng)體實驗室區域分別為:

1.試劑配制區

2.樣品處理(li)區

3.核酸擴增區

PCR實(shi)驗室可以(yi)是(shi)分散形式,也可以(yi)是(shi)組合形式。完成一組PCR實(shi)驗,通常應經(jing)過試劑配(pei)制、樣(yang)品(pin)處(chu)理、核酸擴增及產物分析四個(ge)實(shi)驗過程(cheng),若實(shi)驗工藝需要,還應增加樣(yang)品(pin)粉碎過程(cheng)。

一、分散(san)形(xing)式(shi)PCR實(shi)驗室

所謂分散(san)(san)形式(shi)PCR實(shi)(shi)驗(yan)(yan)室,是指完成上述實(shi)(shi)驗(yan)(yan)過程(cheng)的實(shi)(shi)驗(yan)(yan)用房彼此相(xiang)(xiang)距(ju)較遠,呈分散(san)(san)布置形式(shi)。對(dui)于這種布置形式(shi)的PCR實(shi)(shi)驗(yan)(yan)室,由于各個實(shi)(shi)驗(yan)(yan)之間不易(yi)相(xiang)(xiang)互(hu)干擾,因此無需特殊條件要求。

pcr實驗室

二、組合形(xing)式PCR實驗(yan)室(shi)

所謂組合(he)形式PCR實(shi)(shi)驗室(shi),是指完成(cheng)PCR四(si)個(ge)實(shi)(shi)驗過程的(de)(de)實(shi)(shi)驗用房相鄰(lin)布置,組成(cheng)獨立實(shi)(shi)驗區(qu)域的(de)(de)形式。對于組合(he)形式PCR實(shi)(shi)驗室(shi),由于各個(ge)實(shi)(shi)驗間集中布置,容易造成(cheng)相互干擾(rao),因此,對總體布局以(yi)(yi)及(ji)屏(ping)障系(xi)統具有(you)一定的(de)(de)要求。各室(shi)在入口處設緩(huan)沖間,以(yi)(yi)減少室(shi)內外(wai)空氣(qi)交換。試劑配制室(shi)及(ji)樣品(pin)處理室(shi)宜呈(cheng)(cheng)微正壓,以(yi)(yi)防外(wai)界含(han)核(he)酸氣(qi)溶膠的(de)(de)空氣(qi)進入,造成(cheng)污染(ran);核(he)酸擴增室(shi)及(ji)產物(wu)分(fen)析室(shi)應呈(cheng)(cheng)微負(fu)壓,以(yi)(yi)防含(han)核(he)酸的(de)(de)氣(qi)溶膠擴散出去污染(ran)試劑與樣品(pin)。

如果(guo)使用熒光PCR儀(yi),擴增室和(he)產物分析室可以合(he)并(bing)。

若房(fang)間進深允(yun)許,可設PCR內部專用走(zou)廊。需要指出的是在減少室(shi)內外空氣(qi)交換方面,緩沖(chong)間比專用走(zou)廊更(geng)有意(yi)義。

各個區(qu)域之(zhi)間應具備單向的(de)實驗(yan)工(gong)藝流(liu)、物流(liu)、人流(liu)與氣流(liu),形成(cheng)單向流(liu)程的(de)保護屏障,避免實驗(yan)之(zhi)間的(de)相(xiang)互干(gan)擾,防止核酸(suan)氣溶膠對(dui)實驗(yan)過程造成(cheng)污染產生假(jia)性結果。

 實(shi)驗室的墻體,包括頂棚(peng),應結構牢固、氣密性(xing)好;所有陰角宜采(cai)用圓弧形線(xian)條過渡;墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕(shi)、易(yi)清洗消毒;地面材料應滿足(zu)無(wu)縫隙、無(wu)滲漏、光潔、耐腐蝕(shi)的要求(qiu).。

PCR實驗室設置和驗收

擬設置(zhi)臨床(chuang)基因擴(kuo)增檢驗實驗室的醫療機構按照(zhao)《臨床(chuang)基因擴(kuo)增檢驗實驗室基本設置(zhi)標(biao)準》籌(chou)建(jian)實驗室;籌(chou)建(jian)完成后,由法(fa)定(ding)代表人向衛生部臨檢中(zhong)心(xin)提出(chu)技術驗收申請。

申(shen)請時(shi)需提(ti)交以下(xia)材料:

(一)《醫療機構執業許可證》復(fu)印件(jian);

(二(er))可行性研究(jiu)報告;

1、擬設臨床基(ji)(ji)因(yin)擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)檢驗實驗室機構的(de)所在(zai)地(di)醫療衛生資(zi)源狀況(kuang)、本(ben)機構的(de)基(ji)(ji)本(ben)情況(kuang)、對臨床基(ji)(ji)因(yin)擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)檢驗的(de)需求以及臨床基(ji)(ji)因(yin)擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)實驗室運(yun)行的(de)預(yu)測分析(xi);

2、擬設(she)臨床(chuang)基因(yin)擴增檢驗(yan)實(shi)驗(yan)室的設(she)置平(ping)面圖;

3、擬設臨床基因擴增(zeng)檢(jian)(jian)驗(yan)(yan)實驗(yan)(yan)室將開展的檢(jian)(jian)驗(yan)(yan)項目、實驗(yan)(yan)設備條件和有關技(ji)術(shu)人員資料

PCR實驗室驗收條件:

1根據(ju)衛生部臨(lin)檢中心(xin)規定,凡是根據(ju)需要(yao)開展(zhan)PCR檢測實(shi)驗室(shi)建設(she)的醫療機構均(jun)通過衛生臨(lin)床檢驗中心(xin)實(shi)驗室(shi)驗收并取得(de)合格證書方可開展(zhan)工作。二級以(yi)上醫院(yuan)方可設(she)立PCR實(shi)驗室(shi),含專科醫院(yuan)。

2驗收規定:

三(san)級醫院(yuan)由衛生部臨(lin)(lin)床(chuang)檢驗(yan)(yan)(yan)(yan)中(zhong)心組織專家(一般均為各省(sheng)臨(lin)(lin)床(chuang)檢驗(yan)(yan)(yan)(yan)中(zhong)心主任)進行,二級醫院(yuan)由各個省(sheng)臨(lin)(lin)床(chuang)檢驗(yan)(yan)(yan)(yan)中(zhong)心組織專家(一般為本省(sheng)醫療機構主任級別(bie)專家)進行驗(yan)(yan)(yan)(yan)收(shou)(shou)。按(an)照《臨(lin)(lin)床(chuang)基因(yin)(yin)擴增(zeng)檢驗(yan)(yan)(yan)(yan)實驗(yan)(yan)(yan)(yan)室(shi)基本設置(zhi)標準》對提出申請的臨(lin)(lin)床(chuang)基因(yin)(yin)擴增(zeng)檢驗(yan)(yan)(yan)(yan)實驗(yan)(yan)(yan)(yan)室(shi)進行技(ji)術驗(yan)(yan)(yan)(yan)收(shou)(shou)。驗(yan)(yan)(yan)(yan)收(shou)(shou)完成后,在20日內將驗(yan)(yan)(yan)(yan)收(shou)(shou)報告(gao)寄送至(zhi)申請機構。

驗收人員組成:一(yi)個驗收小(xiao)組一(yi)般(ban)為(wei)3人(ren)(ren),其中(zhong)一(yi)人(ren)(ren)為(wei)聯絡小(xiao)組組長,其他為(wei)其他省臨(lin)床檢驗中(zhong)心主任(ren)(ren)或者本省醫院內(nei)任(ren)(ren)職(zhi)專家(jia)。

PCR實驗室所在科室規定:根據(ju)規定,PCR檢(jian)測(ce)應該由各醫(yi)院的檢(jian)驗(yan)(yan)科(ke)(ke)(ke)(ke)開展,其他科(ke)(ke)(ke)(ke)室如傳染科(ke)(ke)(ke)(ke),皮(pi)膚(fu)科(ke)(ke)(ke)(ke)等,要求開展并申請驗(yan)(yan)收的,應該事(shi)先由各省臨床檢(jian)驗(yan)(yan)中(zhong)心認可。

PCR實驗室人員規定:根據(ju)規定,PCR實驗室(shi)操作人員至(zhi)少(shao)2名,且有PCR上崗培訓合格證。

PCR實驗室設備:PCR實驗(yan)室內所需(xu)要(yao)的醫療設(she)備(bei)均(jun)需(xu)要(yao)取得相關醫療器械(xie)注(zhu)冊許可證,檢(jian)測(ce)試劑均(jun)需(xu)要(yao)取得新藥證書和藥品生產文(wen)號,熒光定量(liang)PCR不得使(shi)用超過五年。

PCR實驗室認證實施規定:

PCR實(shi)(shi)驗(yan)(yan)室(shi)認證驗(yan)(yan)收時,均會給(gei)定(ding)未知(zhi)標(biao)本(ben)5份(一般是HBV-DNA,可能是近一兩年(nian)的(de)衛(wei)生部臨床檢驗(yan)(yan)中心(xin)室(shi)間質控品(pin)),要(yao)求待認證實(shi)(shi)驗(yan)(yan)室(shi)做實(shi)(shi)驗(yan)(yan)并打印(yin)報告單作(zuo)為(wei)驗(yan)(yan)收的(de)重要(yao)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)依據。一般要(yao)求5份標(biao)本(ben)的(de)定(ding)量結果(guo)必須在范圍(wei)值之(zhi)內,否則不合格。

PCR實驗室各區域管理規定:
 


試劑準備區工作制度

一(yi)、實(shi)驗(yan)人員(yuan)進入該區(qu)須更(geng)換工(gong)作(zuo)服,穿本區(qu)專(zhuan)(zhuan)用(yong)綠色工(gong)作(zuo)服,戴(dai)帽子、口罩及更(geng)換專(zhuan)(zhuan)用(yong)拖鞋。

二(er)、實(shi)驗員在試劑準(zhun)備區接(jie)收標本、準(zhun)備實(shi)驗用(yong)的試劑。

三、實驗(yan)(yan)員每(mei)天收齊標本(ben)(ben),驗(yan)(yan)收登(deng)記后,將標本(ben)(ben)通過傳(chuan)遞窗送入(ru)標本(ben)(ben)制備區(qu)。四、在試劑準備區(qu)配置好試劑后放入(ru)冰箱內備用。需要時(shi)通過傳(chuan)遞窗送入(ru)標本(ben)(ben)制備區(qu)。

五(wu)、每天(tian)的(de)(de)標本及配置(zhi)的(de)(de)試劑須登記記錄,應書寫工整詳細,使用本區專用的(de)(de)、帶(dai)有(you)本室標識的(de)(de)記錄本、紙和筆。

六(liu)、將本(ben)(ben)區廢棄物裝入本(ben)(ben)室垃圾袋中(zhong),有(you)專人將垃圾帶出實驗室交醫院集中(zhong)處理。

七、實驗后須使用含氯消毒液及75%的乙醇擦拭實驗臺面,紫外燈消毒30分鐘,記錄紫外燈、冰箱、離心機等儀器的使用情況。
PCR篩查檢測工作人員

標本制備區工作制度

一、實驗人員進入該(gai)區須更換工(gong)(gong)作服(fu),穿上本區專(zhuan)用藍色工(gong)(gong)作服(fu),戴(dai)帽子、口罩(zhao)及更換專(zhuan)用拖(tuo)鞋(xie)。

二、把已(yi)準備好(hao)的試劑放入冰箱試劑存(cun)放專(zhuan)區暫存(cun)。

三、記錄溫(wen)濕度(du)計讀數、冰箱的(de)溫(wen)度(du)。

四、嚴格按照SOP文(wen)件(jian)及試劑(ji)盒要求進行實驗操作,加樣好的PCR管(guan)須通過(guo)傳遞窗(chuang)送(song)入擴增(zeng)及產物區。

五(wu)、使用(yong)本(ben)區專用(yong)的(de)移液(ye)(ye)器(qi)及(ji)吸頭(tou),使用(yong)過的(de)離心管、吸頭(tou)須置(zhi)于盛有含(han)氯消毒液(ye)(ye)的(de)廢液(ye)(ye)缸中,實驗(yan)(yan)完(wan)畢后及(ji)時處理(li)。將本(ben)區廢棄物裝入本(ben)室垃圾袋中,有專人將垃圾帶出實驗(yan)(yan)室交醫院(yuan)集(ji)中處理(li)。

六、使用(yong)本區專用(yong)的帶(dai)有(you)本區標識的記錄(lu)本、紙和筆,其他區的用(yong)品不(bu)得(de)帶(dai)入本區。

 七(qi)、實驗完畢關(guan)閉所有儀器(qi),記錄(lu)儀器(qi)使用時間和(he)運行(xing)狀態。

八、實(shi)驗后須使(shi)(shi)用(yong)含氯消毒(du)液及75%的乙醇擦(ca)拭實(shi)驗臺面,紫外燈消毒(du)30分鐘,記錄紫外燈、冰箱、離心機等儀(yi)器的使(shi)(shi)用(yong)情況(kuang)。

PRC產物分析工作人員

擴增及產物分析區工作制度

一、實(shi)驗人員進入該區須(xu)更換工(gong)作(zuo)服,穿上(shang)本(ben)區專用粉紅色工(gong)作(zuo)服,戴(dai)帽子、口(kou)罩(zhao)及更換專用拖鞋。

二、記錄溫濕度(du)計讀數、冰箱的溫度(du)。

 三、本區主要進行(xing)目的(de)基因的(de)擴增(zeng)及分(fen)析,須熟(shu)悉各擴增(zeng)儀的(de)使用,擴增(zeng)分(fen)析完后,記錄結果。

四(si)、得到當天室(shi)內質(zhi)(zhi)控結(jie)果后(hou),及時(shi)記錄在室(shi)內質(zhi)(zhi)控圖上并進行分析。

五(wu)、試驗完畢(bi)后(hou)關掉擴增儀(yi),記錄儀(yi)器使(shi)用時間和運行狀(zhuang)態。

六、每周由實驗室負責人對進行清(qing)潔維護并記錄(lu)。

七(qi)、擴(kuo)增分析完后的反(fan)應管,須裝(zhuang)入本(ben)室垃圾(ji)袋中(zhong),有專(zhuan)人將垃圾(ji)帶出實驗室交醫院(yuan)集中(zhong)處理。

八、使用(yong)本區(qu)專(zhuan)用(yong)的(de)(de)帶有(you)本區(qu)標(biao)識的(de)(de)記錄本、紙和筆,其他區(qu)的(de)(de)用(yong)品不(bu)得(de)帶入本區(qu)。

九、實驗(yan)后須使用含(han)氯消毒液及75%的乙醇擦拭實驗(yan)臺面,紫外(wai)燈消毒30分鐘,記錄紫外(wai)燈、冰箱、離心機等儀器(qi)的使用情(qing)況。


 實(shi)驗室成功案(an)例推薦

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