臨床基因擴增實驗室案例
項目客戶:山東大學附屬生殖醫院
項目名稱:臨床基因擴增檢驗實驗室,分子遺傳室
項目面積:17460平方米
項目地點:山東濟南
建設單位:中山市科瓦特實驗室
建設單位:中山市科瓦特實驗室
項目內容:
實驗室裝修工程
實驗室空調與潔凈工程
實驗室通風工程
實驗室供氣系統
實驗室純水系統
實驗室環保系統
以下為科瓦特實驗室驗收后部分案例現場展示:
實驗室消毒區與傳遞區
實驗室裝修細節圖:
實驗室走廊 主實驗室
實驗室通風過濾與照明 PCR實驗室準備區
分子遺傳室 遺傳基因研究區
PCR標本制備區 PCR清洗區
1 概述
臨床基因擴增實驗又稱PCR實驗,這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規范的操作
為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設越來越得到重視,因為它對檢測結果的可靠性、準確性
和安全性起到至關重要的作用。本文主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局,空調通風系統設計、氣
流控制和污染的防制幾個方面對 實驗室(shi)設計中的主要特(te)點進行了闡述。臨床基因擴增檢驗實驗室設計的核
心問題是如何避免污染。因此,實驗室的平面布局、空調通風系統設計、氣流控制等都是圍繞這個核心問
題進行的。下面就對這幾個方面分別進說明。
為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設越來越得到重視,因為它對檢測結果的可靠性、準確性
和安全性起到至關重要的作用。本文主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局,空調通風系統設計、氣
流控制和污染的防制幾個方面對 實驗室(shi)設計中的主要特(te)點進行了闡述。臨床基因擴增檢驗實驗室設計的核
心問題是如何避免污染。因此,實驗室的平面布局、空調通風系統設計、氣流控制等都是圍繞這個核心問
題進行的。下面就對這幾個方面分別進說明。
2 PCR實驗室平面布局
臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混
合物配制和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,
即只能從試劑貯存和準(zhun)備區→標本制(zhi)備區→擴(kuo)增(zeng)反應混(hun)合(he)物(wu)配制(zhi)和擴(kuo)增(zeng)區→擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)分析區。 各實驗區之
間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混
合物配制和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,
即只能從試劑貯存和準(zhun)備區→標本制(zhi)備區→擴(kuo)增(zeng)反應混(hun)合(he)物(wu)配制(zhi)和擴(kuo)增(zeng)區→擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)分析區。 各實驗區之
間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
PCR實驗室平面布置示意(yi)圖如圖1所(suo)示。
3 實驗室空調通風系統設計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣
流組織形式。同時,要嚴(yan)格控制(zhi)送、排風的(de)比例以保(bao)證各(ge)實驗區的(de)壓(ya)力要求。
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣
流組織形式。同時,要嚴(yan)格控制(zhi)送、排風的(de)比例以保(bao)證各(ge)實驗區的(de)壓(ya)力要求。
3.1 試劑貯存和準備區
該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材
料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試
劑。 對與氣流壓力的控制,本區并(bing)沒有(you)嚴格(ge)的要求。
該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材
料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試
劑。 對與氣流壓力的控制,本區并(bing)沒有(you)嚴格(ge)的要求。
3.2 標本制備區
該區域主(zhu)要進(jin)行的(de)操(cao)作為臨(lin)床標本的(de)保存(cun)、核(he)酸(RNA、DNA)提取、貯(zhu)存(cun)及其加入至擴增反應管和測定(ding)RNA
該區域主(zhu)要進(jin)行的(de)操(cao)作為臨(lin)床標本的(de)保存(cun)、核(he)酸(RNA、DNA)提取、貯(zhu)存(cun)及其加入至擴增反應管和測定(ding)RNA
時cDNA的(de)合成。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污
染。另外,由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所(suo)致的污染(ran),所(suo)以應避免在本區內不必要的走動。
染。另外,由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所(suo)致的污染(ran),所(suo)以應避免在本區內不必要的走動。
3.3 擴增反應混合物配制和擴增區
該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區)的
加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。在巢式PCR測定中,
通常在 輪擴增后必須打開反應管,因此巢式擴(kuo)增有較高(gao)的(de)污(wu)染危(wei)險性,第(di)二次加(jia)樣必須在(zai)本區(qu)內進行。
該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區)的
加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。在巢式PCR測定中,
通常在 輪擴增后必須打開反應管,因此巢式擴(kuo)增有較高(gao)的(de)污(wu)染危(wei)險性,第(di)二次加(jia)樣必須在(zai)本區(qu)內進行。
本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,
應盡量減少在本區內(nei)的不必要的走動。個別操作如加(jia)樣等(deng)應在超凈(jing)臺內(nei)進行。
應盡量減少在本區內(nei)的不必要的走動。個別操作如加(jia)樣等(deng)應在超凈(jing)臺內(nei)進行。
3.4 擴增產物分析區
該(gai)區域(yu)主要進行的操(cao)作(zuo)為(wei)擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析(xi)儀(yi)器檢(jian)測,此區域(yu)可不設。
本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴
增產物從本區擴散至(zhi)其它區域。
該(gai)區域(yu)主要進行的操(cao)作(zuo)為(wei)擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析(xi)儀(yi)器檢(jian)測,此區域(yu)可不設。
本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴
增產物從本區擴散至(zhi)其它區域。
4 污染的預防與控制
PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污
染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染,實驗就必須停止,直到
找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源
不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防(fang),而不是排除。
PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污
染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染,實驗就必須停止,直到
找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源
不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防(fang),而不是排除。
4.1 工作區域的嚴格劃分
(1)各個實驗區域設置合理(li);
(1)各個實驗區域設置合理(li);
(2)各個實驗區域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等),以避免各個不同實驗區域設
備物品、試劑等發生混淆。
備物品、試劑等發生混淆。
4.2 合理的系統設置
(1)合理的(de)空(kong)(kong)調通風(feng)系(xi)統(tong)設(she)置,盡量采用全送全排的(de)空(kong)(kong)調系(xi)統(tong);
(1)合理的(de)空(kong)(kong)調通風(feng)系(xi)統(tong)設(she)置,盡量采用全送全排的(de)空(kong)(kong)調系(xi)統(tong);
(2)嚴格的(de)氣(qi)流壓力控制,保證不同的(de)實驗區(qu)內不同的(de)壓力要求(qiu)。
4.3 規范的操作
(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗
的工作;
(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗
的工作;
(2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效
地防止污染的措施;
地防止污染的措施;
(3)清(qing)潔(jie)工作(zuo)及時(shi)、正確。實驗工作(zuo)結束(shu)后,必須立(li)即對本區進行清(qing)潔(jie)。除常規的(de)消毒(du)液(ye)體對表面進行
擦拭消(xiao)(xiao)毒或紫(zi)外(wai)線燈的(de)照射(she)消(xiao)(xiao)毒外(wai),對一(yi)些實驗(yan)設(she)備還應進行高壓消(xiao)(xiao)毒處理。
4.4 嚴格的管理
(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立
的通道和進出整個實驗區的(de)門;
(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立
的通道和進出整個實驗區的(de)門;
(2)在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的
工作服帶至其它區域;
工作服帶至其它區域;
(3)盡量減(jian)少(shao)在(zai)實驗區(qu)內(nei)不必要的走動以減(jian)少(shao)交叉污染的可能性(xing)。
(4)擴增產物分析區是最主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒
后在遠離實驗室的地方棄掉(diao),用過的吸(xi)頭等(deng)(deng)一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等(deng)(deng);
后在遠離實驗室的地方棄掉(diao),用過的吸(xi)頭等(deng)(deng)一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等(deng)(deng);
(5)擴(kuo)增產物(wu)分析(xi)區可能(neng)會用到某些(xie)可致基因突(tu)變和有毒物(wu)質,應特別注意實驗人員的安全(quan)防護(hu)。
4.5 完備的實驗室配套設施
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備
和儀器,如超凈工作臺、離心機(ji)、加樣器(qi)等。
更多實驗室(shi)整體(ti)規劃設計方案(an)與案(an)例請(qing)聯系科瓦特實驗室。0760-23626816.
QQ: 1695536823
免費(fei)設計方案與報價(jia):180-2201-9058 陳(chen)工
技(ji)術(shu)咨詢:133-1828-1228 周先(xian)生
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備
和儀器,如超凈工作臺、離心機(ji)、加樣器(qi)等。
更多實驗室(shi)整體(ti)規劃設計方案(an)與案(an)例請(qing)聯系科瓦特實驗室。0760-23626816.
QQ: 1695536823
免費(fei)設計方案與報價(jia):180-2201-9058 陳(chen)工
技(ji)術(shu)咨詢:133-1828-1228 周先(xian)生
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此(ci)文關鍵字:基因擴增實驗室。
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